島津液相色譜柱的系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統,樣品溶液經進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相)內,由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數,在兩相中作相對運動時,經過反復多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式打印出來。
影響島津液相色譜柱性能的物理因素有下面這些:
(1)硅膠純度
硅膠純度和殘留金屬離子濃度,硅膠的雜質會影響化合物的峰形,硅膠表面的金屬含量高會影響堿性化合物的峰形,易發(fā)生拖尾。
(2)色譜柱尺寸
填料床的長度和內徑,增加色譜柱長度,可以在一定程度上提高柱效,但也會升高壓力和導致峰展寬;寬柱徑,提高載樣量,但也會增加橫向擴散,同樣會導致峰展寬。窄柱徑可以節(jié)約溶劑,可減少橫向擴散,但壓力較大,對系統要求較高。
(3)顆粒形狀及粒徑
球形顆粒柱效高、重現性好、柱床結構均勻,不規(guī)則形柱床結構不均勻、流動相線速度不均勻,容易譜帶展寬;平均顆粒直徑,粒徑越小,柱效越高,柱壓也越高。粒徑分布越廣則柱效越低,壓力越大。
(4)顆粒表面積
顆粒外表面和內部孔表面的總和,以m2/g表示,相對而言高表面積對樣品具有較強的保留能力,更大的柱容量和分離度。而低表面積能更快達到平衡狀態(tài),更適合梯度洗脫程序。
(5)孔徑
島津液相色譜柱顆粒的孔或腔的平均尺寸,范圍是80~300,大孔徑的填料顆粒可以延長大分子溶質在填料表面的滯留時間,改善分離,所以大孔徑填料適合分離大分子化合物或者水動力體積較大的分子。